Маҳсулот

X-gal (инчунин ихтисоршуда BCIG барои 5-бромо-4-хлоро-3-индолил-β-D-галактопиранозид) як пайвастагии органикӣ мебошад, ки аз галактоза бо индоли ивазшуда алоқаманд аст.Ин пайвастагиро Ҷером Хорвитс ва ҳамкорон дар соли 1964 синтез кардаанд. Номи расмии кимиёвӣ аксар вақт ба ибораҳои камтар дақиқ, вале камтар душвор, ба монанди галактозид бромохлороиндоксил кӯтоҳ карда мешавад.X аз индоксил метавонад манбаи X дар контраксияи X-gal бошад.X-gal аксар вақт дар биологияи молекулавӣ барои санҷиши мавҷудияти фермент, β-галактозидаза дар ҷои ҳадафи муқаррарии худ, як β-галактозид истифода мешавад.Он инчунин барои муайян кардани фаъолияти ин фермент дар гистохимия ва бактериология истифода мешавад.X-gal яке аз бисёр гликозидҳои индоксил ва эфирҳо мебошад, ки дар натиҷаи гидролизи ферментӣ, ки пайвастагиҳои кабуди ҳалнашавандаро ба рангҳои индиго монанд мекунанд.

X-gal як аналоги лактоза аст ва аз ин рӯ метавонад тавассути фермент β-галактозидаза, ки пайванди β-гликозидиро дар D-лактоза ҷудо мекунад, гидролиз мешавад.X-gal, вақте ки бо β-галактозидаза ҷудо мешавад, галактоза ва 5-бромо-4-хлоро-3-гидроксииндол - 1 медиҳад. Охирин баъд худ аз худ dimerizes мешавад ва ба 5,5'-дибромо-4,4'-дихлоро оксид мешавад. -индиго - 2, маҳсулоти кабуди шадид, ки ҳалнашаванда аст.Худи X-gal бе ранг аст, бинобар ин мавҷудияти маҳсулоти кабуд-ранг метавонад ҳамчун санҷиш барои мавҷудияти β-галактозидазаҳои фаъол истифода шавад.Ин инчунин имкон медиҳад, ки β-галактозидазаи бактериявӣ (ба ном lacZ) ҳамчун гузоришгар дар барномаҳои гуногун истифода шавад.

Дар таҳлили ду гибридӣ, β-галактозидаза метавонад ҳамчун гузоришдиҳанда барои муайян кардани сафедаҳое, ки бо ҳамдигар ҳамкорӣ мекунанд, истифода шавад.Дар ин усул, китобхонаҳои геномӣ метавонанд барои ҳамкории сафедаҳо бо истифода аз хамиртуруш ё системаи бактериявӣ тафтиш карда шаванд.Дар он ҷое, ки байни сафедаҳо тафтиш карда мешаванд, таъсири бомуваффақият вуҷуд дорад, он боиси пайвастшавии домени фаъолсозӣ ба промоутер мегардад.Агар промоутер бо гени lacZ алоқаманд бошад, истеҳсоли β-галактозидаза, ки дар ҳузури X-gal ба ташаккули колонияҳои кабуд-пигментӣ оварда мерасонад, аз таъсири мутақобилаи бомуваффақияти байни сафедаҳо шаҳодат медиҳад.Ин техника метавонад бо скрининги китобхонаҳои андозаи камтар аз 106 маҳдуд карда шавад. Ҷудошавии бомуваффақияти X-gal инчунин аз сабаби ноустувории индол бӯи ба таври назаррас бад ба вуҷуд меорад.

Азбаски худи X-gal бе ранг аст, мавҷудияти маҳсулоти кабуд метавонад ҳамчун санҷиш барои мавҷудияти β-галактозидазаи фаъол истифода шавад.

Ин муайянкунии осони ферментҳои фаъол имкон медиҳад, ки гени βгалактозидаза (гени lacZ) ҳамчун гени хабарнигор дар барномаҳои гуногун истифода шавад.