Маҳсулот

Барои мушаххасан муайян кардани якчанд метаболитҳои 5-фторурацил (5-ФУ) ва ду нуклеотиди эндогении монофосфат, мо усули аслӣ дар асоси хроматографияи моеъ-тандеми масс-спектрометрия (LC-MS/MS) таҳия кардем.Ин таҳлил имкон дод, ки муайян карда шавад: (i) истеҳсоли дохили ҳуҷайраи 5-фтор-2′-дезоксиуридин-5′-монофосфат (5-FdUMP) аз 5-ФУ ё 5-фтор-2′-дезоксиуридин (5-ФдУрд) , (ii) таъсири консентратсияи 5-FdUMP ба таносуби дохили ҳуҷайравии 2′-дезоксиуридин-5′-монофосфат (dUMP)/тимидин-5′-монофосфат (TMP) ва (iii) дараҷаи секрецияи 5-FdUMP ва 5-FU аз ҳуҷайраҳои фарҳангии инсон тавассути интиқолдиҳандагони ABC.Дар шароити таҷрибавии мо ҳуҷайраҳо бо 5-FU ё 5-FUrd инкубатсия карда шуданд.Сипас, сафедаҳои ҳуҷайра бо метанол таҳшин карда шуданд.Ин тартиб барқарорсозии баланди истихроҷро таъмин намуд.Илова бар ин, барои чен кардани секрецияи 5-FU ва 5-FdUMP аз ҳуҷайраҳо, мо миқдори ин молекулаҳоро дар муҳити фарҳанг анҷом додем.Медиа мустақиман сӯзандору (5-FU) ё зери истихроҷи марҳилаи сахт бо истифода аз картриджи экстраксияи Oasis Wax (5-FdUMP) гузаронида шуд.Ҷудо кардани таҳлилҳо дар сутуни dC18 Atlantis 3,5 мкм, (100 мм × 2,1 мм id) бо режими изократикӣ бо истифода аз буфери формати аммоний/метанол/об (5/5/90, v/v) ҳамчун фазаи мобилӣ анҷом дода шуд.Мухлати кор аз 6,2 дакика зиёд набуд.Таҳлилҳо дар интерфейси электроспрей дар ҳолати ионҳои манфӣ ионизатсия карда шуданд.Мо усулро дар доираи 2,5-150 нг мл -1 мувофиқи пайвастагиҳо тасдиқ кардем.Тағйирпазирии дохилӣ ва байни таҳлилҳо дар тӯли ҳафт рӯз камтар аз 10% буд.Ҳама пайвастагиҳо дар ҳуҷайраҳо ё дар муҳити фарҳанг устувор буданд, вақте ки намунаҳо дар -20 °C ҳадди аққал ду ҳафта нигоҳ дошта мешуданд ва пас аз се давраи яхкунӣ.Дар ҳарду васоити ахбори омма ягон таъсири матритса мушоҳида нашудааст.